Uma vez que as células que cultivamos

fábrica de célulasestão contaminados, a maioria deles são difíceis de manusear.Se as células contaminadas forem valiosas e difíceis de obter novamente, os seguintes métodos podem ser usados ​​para removê-las.

1. Use antibióticos

Os antibióticos são mais eficazes para matar bactérias emfábricas de células.A medicação combinada é mais eficaz do que a medicação isolada.A medicação preventiva é mais eficaz do que a medicação após contaminação.A medicação preventiva geralmente utiliza um antibiótico duplo (penicilina 100u/mL mais estreptomicina 100μg/mL).Após a contaminação, o método de limpeza precisa ser de 5 a 10 vezes maior que a quantidade habitual.O medicamento deve ser utilizado por 24 a 48 horas após a adição, sendo então substituído pela rotina habitual.Fluido de cultura.Este método pode ser eficaz nos estágios iniciais da contaminação.Além da penicilina e da estreptomicina, os antibióticos utilizados também podem incluir gentamicina, canamicina, polimixina, tetraciclina, nistatina, etc. Comumente usados ​​são 400 a 800 μg/mL de canamicina ou 200 μg/mL de tetraciclina.O meio é trocado a cada 2 a 3 dias e repassado por 1 a 2 gerações para tratamento.Nos últimos anos, foi relatado que 4-fluoro, 2-hidroxiquinolina (Ciprofloxacina, Cip), derivado de Pleu-romutilina (derivado de Pleu-romutilina, BM-Ciclina2: BM-1 e derivado de tetraciclina (BM-2)) Antibióticos são eficaz em matar o micoplasma quando usado sozinho ou em combinação.Estes três antibióticos são todos preparados em soluções concentradas 250X em PBS e armazenados a -20°C para uso posterior.A concentração de uso Cip é 10 μg/mL, BM-1 é 10 μg/mL e BM-2 é 5μg/mL.Ao usar, primeiro aspire o meio de cultura contaminado, adicione meio de cultura RPMI1640 contendo BM-1, depois aspire o meio de cultura após 3 dias, adicione meio de cultura RPMI1640 contendo BM-2 e cultive por 4 dias, e assim por diante por 3 dias consecutivos .rodadas, até que seja comprovado pela microscopia de coloração fluorescente 33258 que o micoplasma foi eliminado, então o meio de cultura normal é adicionado para cultura e passagem 3-4 vezes.

2. Tratamento de aquecimento

A incubação de cultura de tecidos contaminados a 41°C durante 18 horas pode matar o micoplasma, mas tem efeitos adversos nas células.Portanto, um teste preliminar deve ser realizado antes do tratamento para explorar o tempo de aquecimento que pode matar o micoplasma ao máximo e ter o menor impacto nas células.Este método às vezes não é confiável.Se tratado primeiro com medicamentos e depois aquecido a 41°C, o efeito será melhor.

3. Use soro específico para micoplasma

A contaminação por micoplasma pode ser removida com soro imune a micoplasma de coelho a 5% (título de hemaglutinação 1:320 ou superior).Como o anticorpo específico pode inibir o crescimento do micoplasma, torna-se negativo 11 dias após o tratamento com anti-soro e permanece negativo 5 meses depois.é negativo.No entanto, este método é mais problemático e não tão conveniente e económico como o uso de antibióticos.

4. Outros métodos

Além dos métodos de remoção de contaminação acima mencionados, existem também métodos de inoculação e esterilização em animais, métodos de fagocitose de macrófagos, métodos de adição de bromouracil a contaminadosgarrafas de culturae depois irradiá-los com luz e métodos de filtração, etc., mas todos são mais problemáticos e ineficazes.Portanto, uma vez que ocorre a contaminação por micoplasma, a menos que seja de valor particularmente importante, é geralmente descartado e recultivado.

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